O protagonista da mítica série de ação e espionagem tática Metal Gear Solid estréia em Super Smash Bros. Brawl, assim como Pit (herói de Kid Icarus), Zero Suit Samus (como o retorno de Samus Aran de Metroid: Zero Mission), Wario (o antagonista de Mario, com seu super poder gastrointestinal atômico) e Meta Knight (rival do protagonista da série Kirby). O jogo ainda conta com a presença dos personagens que sempre estiveram na série, como Fox McCloud, Kirby, Link, Pikachu e o mascote da Nintendo, Mario; todos têm novos movimentos e combos à disposição dos jogadores.

Outra inovação da série é a introdução de um novo item que só pode ser usado uma vez a cada partida: o Smash Ball, que dá energia para que o jogador realize um golpe devastador, o qual se constitui em um ataque específico para cada personagem.